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无菌播种的主要过程

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-06-09  浏览次数:783
  (一)实践目的 
    学习利用植物种子的胚轴进行愈伤组织培养的方法,主要是种子的无菌接种技术。


 
    (二)实践地点和时间 
    植物组培室、建议4学时 
    (三)实践用具与材料 
    超净工作台、手术剪、枪状镊、酒精灯、酒精瓶、纱布、高压灭菌锅、电子天平、盛物篮、植物种子、70%酒精、0.1%升汞、ZT、2,4—D、大量元素、微量元素、琼脂、蔗糖 
    (四)实践内容 
    1、培养基制备 
    配制MS培养基:用大量元素、微量元素、维生素、铁盐配制,不加植物生长物质。 
    每升培养基加入30/L蔗糖、8g琼脂,将pH值调节到5.8。 
    2、高压灭菌 
    培养基入高压锅1.11-1.12Pa下稳压灭菌23分钟,制备无菌水,同样高压灭菌30分钟,灭菌时将接种器械和纱布等放入高压锅一同灭菌。 
    3、无菌苗的制备 
    选择健康饱满的种子,流水下清洗干净,置超净工作台上。无菌水冲洗2-3次后,视材料情况,(较老较硬的种子)可剥离种皮后0.1%升汞灭菌,也可以(较嫩较软的种子)先灭菌后再用器械无菌剥离种皮。 
    4、无菌播种 
    剥离种皮的种子用无菌水2-3次冲洗后,接种到已制备的MS培养基中,每瓶培养基接种一粒。做好标记,置于培养室光下培养,以后一周随时观察生长状况。 
    5、清洁整理 
    清洁整理工作台和组培室,并将器械等工具清洗整理好以备下次实训使用。 
    (五)作业 
    写出下胚轴愈伤组织培养实践报告,并写明下胚轴愈伤组织培养的操作要领 
    (六)评分标准 
    无菌播种操作正确,成活率高,污染率小。
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